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拍拉新闻 拍打科学实验论文:机械拍打小鼠腿部组织诱导耐损伤改变的实验研究

时间:2018.11.13 09:45 951 0 0

编者按

拍打是疏通经络最简单有效的方法之一,我们在推广时强调拍打需要在自己能承受的范围内由轻到重,循序渐进,每次每处20分钟以上。其中,时间要足够长,才会有效果。单纯机械的拍打有作用吗?我们在收集资料的时候发现了这篇论文,通过一个新角度和建立新实验模型对拍打进行测试。希望这一思路能引起更多专业人士的注意。


作者:林燕;余文静;张春燕;王顺容;李著华;


论文来源:《现代预防医学2011年第38卷第22期》


下载地址:中国知网


摘要


[目的]采用机械拍打小鼠腿部组织诱导机体的耐损伤变化, 初步探讨其发生机制。


[方法]60 只健康小鼠, 雌雄各半, 随机分为A、B、C、D、E 组。A 组不进行机械拍打, 其余各组每天以50 HZ·min-1 的频率、1N 的强度机械拍打小鼠右腿10 min。B 组拍打4 d, C 组拍打8 d, D 组拍打16 d, E 组拍打32 d。各组达到拍打时间后, 取拍打部位组织做组织学检查和免疫组织化学分析。


[结果](1) 打拍部位肉眼改变: A 组小鼠皮肤、皮下及肌肉组织颜色正常。B 组皮肤红肿, 皮下淤血明显。C 组皮肤严重损伤, 明显肿胀, 表皮破溃, 出血, 肌肉萎缩。D 组皮肤损伤逐渐修复, 破损处开始结痂, 皮肤变粗糙, 变肌肉粗壮。E 组皮肤损伤完全修复, 皮肤更粗糙, 角质层明显增厚, 肌肉更粗壮。(2)普通显微镜下观察: A 组皮肤组织结构、肌纤维正常; B 组皮肤组织结构不完整, 肌纤维断裂, 部分萎缩;C 组皮肤组织结构破坏, 肌纤维明显萎缩; D 组皮肤组织结构完整, 肌纤维萎缩逐渐减少, 部分肌纤维增粗; E 组皮肤组织结构完整, 肌纤维明显增粗, 肌束间隙变窄或消失。(3) 免疫组织化学结果显示: D 组、E 组拍打部位皮肤和肌肉组织的HSP70 表达较A 组明显增高。


[ 结论](1) 用一定频率, 一定强度机械拍打小鼠腿部组织能诱导其产生耐损伤改变, 雌雄鼠比较此变化无明显差异。(2) 机械拍打可致小鼠受拍打部位皮肤肌肉组织中的HSP70 表达上调。(3) 机械拍打诱导小鼠产生耐损伤变化可能与局部组织重构、HSP70 表达上调有关。


关键词: 耐损伤; 抗损伤; 动物模型; HSP70


生物体暴露于自然界中, 极易受到各种有害因子的损伤,与此同时, 机体潜在的强大的抗损伤系统随时迎对来自体内外的各种损伤因子的袭击。损伤与抗损伤的斗争决定着生物体的生存与发展。小于致死量的损害因子多次或反复作用于机体,可以增强机体的抗损伤能力, 诱导提高机体的耐损伤性。Ostadal[1]报道, 慢性缺氧或长期缺氧发作的先心病患儿对缺血缺氧的耐受性较强, 经研究[2]缺血前预处理能稳定心肌细胞膜、减少心肌细胞水肿、减轻细胞脂质过氧化损伤、保护缺血再灌注未成熟心肌的形态结构。但目前国内外对此研究甚少,其产生机制尚不清楚。本研究采用机械拍打小鼠右后腿建立耐损伤模型, 探讨受拍打部位的组织学变化和皮肤、肌肉组织中的HSP70 表达变化, 为进一深入研究机体的耐损伤变化提供实验基础。


1 材料与方法


1.1 实验材料


60 只健康小鼠, 雌雄各半, 周龄7~8 周, 体重45~50 g,清洁级动物, 由泸州医学院实验动物科提供。HSP70 免疫组化试剂盒(美国,ABZOOM 公司)


1.2 实验方法


1.2.1 动物实验60 只健康小鼠, 雌雄各半, 随机分为A、B、C、D、E 组。A 组不进行机械拍打, 其余各组每天以50HZ·min-1 的频率、1N 的强度机械拍打小鼠右腿10 min。B 组拍打4 d, C 组拍打8 d, D 组拍打16 d, E 组拍打32 d。各组达到拍打时间后, 取拍打部位组织做组织学检查和免疫组织化学分析。


1.2.2 观察记录拍打期间肉眼观察记录动物的一般情况和拍打部位的变化。


1.2.3 组织学检查处死小鼠, 取拍打全层皮肤及肌肉用AAF液固定6~8 h, 梯度酒精脱水、氯仿透明、石蜡包埋, 常规切片(4 μl), 做HE 染色。在镜下观察皮肤及肌肉组织结构。


1.2.4 免疫组织化学分析按试剂盒说明书操作, 由同一人采用盲法在AX-70 型Olympus 光学显微镜下观察, 在400 倍显微镜下每组选10 个视野, 用美国MediaCyber-netics 公司Image-ProPlus6.0 软件分析系统处理, 比较各组平均光密度值。


1.3 统计学处理本实验计量资料以平均数±标准差(x ± s)表示, 采用SPSS12.0 for Windows 软件包进行统计。采用单因素的方差分析, P﹤0.05 为差异有统计学意义。


2 结果


2.1 肉眼观小鼠受拍打部位的变化


A 组皮肤光滑, 呈粉红色, 角质层不明显; B 组皮肤红肿, 有轻微擦伤, 皮下淤血, 肌肉组织肿胀; C 组皮肤全层裂伤, 皮下渗血, 肌肉组织明显肿胀; D 组皮肤轻微红肿, 变粗糙, 破损部位开始结痂, 角质层增厚, 肌肉粗壮; E 组皮肤损伤完全修复, 皮肤颜色正常, 更加粗糙, 角质层明显增厚, 肌肉更粗壮。同组雌雄鼠比较未见明显差异。见图1。

图1 5 组小鼠受拍打部位外观


2.2 组织学观察


A 组小鼠皮肤、肌肉组织结构完好; B 组皮肤结构不完整, 肌纤维部分断裂, 轻度萎缩; C 组皮肤无完整结构, 肌纤维明显萎缩; D 组皮肤结构完整, 肌纤维萎缩逐渐减少, 部分肌纤维增粗; E 组皮肤结构完整, 肌纤维明显增粗, 肌束间隙变窄或消失。同组雌雄鼠比较未见明显差异。见图2、3。

图2 5 组小鼠受拍打部位皮肤组织结构

图3 5组小鼠受拍打部位肌肉组织结构


2.3 受拍打部位皮肤肌肉组织中HSP70 的表达


以细胞核及核周围胞质出现棕色颗粒为HSP70 表达阳性。结果显示, A 组小鼠组皮肤及肌细胞少量表达HSP70, 表达部位在细胞核及核周围的胞质; B 组皮肤及肌细胞少量表达HSP70, 与A 组相比表达的平均光密度不变, 无统计学差异(P﹥0.05); C 组皮肤及肌细胞少量表达HSP70, 与A 组相比表达的平均光密度不变, 无统计学差异(P﹥0.05); D 组皮肤及肌细胞大量表达HSP70, 与A 组相比表达的平均光密度明显增大, 有统计学差异(P﹤0.05); E 组皮肤及肌细胞大量表达HSP70, 与A 组相比表达的平均光密度增大, 有统计学差异(P﹤0.05)。同组内雌雄比较, HSP70 表达的平均光密度,差异无统计学意义。见表1, 图4。

图4 小鼠受拍打部位皮肤和HSP70表达



3 讨论


3.1 拍打时间、强度对建立耐机械拍打损伤模型的影响及意义


小鼠皮肤及肌肉对机械拍打的耐损伤模型国内外文献均无报导。其模型复制既要受动物品系、动物个体差异的影响, 又要受拍打时间、拍打频率、拍打强度的影响, 使模型的复制非常不确定。本实验基于以上考虑, 自制机械拍打装置, 将动物分组以不同时间, 不同强度进行拍打, 通过反复实验观察小鼠拍打部位外观及组织学变化, 从而确定比较适宜的拍打时间、拍打强度来建立较理想的机械拍打小鼠皮肤及肌肉组织的耐损伤模型。


经反复预实验, 我们发现用HZ·min-1 的频率, 1 N 的强度拍打10 min 能达到理想效果。因此, 选择以每天50 HZ·min-1, 1 N 的强度拍打10 min 来建立耐损伤模型, 本实验结果显示建模成功。


3.2 局部组织的形态学变化及意义


实验结果显示: B 组轻微损伤, C 组随拍打时间的增加,局部组织损伤严重。但随拍打时间继续增加, D 组的损伤呈现减轻。当拍打到32 d 时(E 组), 皮肤损伤完全修复。这些变化显示出小鼠的受拍打部位已对机械性损伤产生了明显耐受,同样的机械拍打已不再对该部位造成损伤。在耐损伤变化中,以皮肤变粗糙和肌纤维增粗最明显, 提示局部组织重构可能是耐受机械损伤的主要组织学变化。


3.3 局部组织中HSP70 的表达及意义


HSP70 是一种应激蛋白, 在组织细胞受损伤时合成增加。HSP70 有很重要的生理功能: 作为分子伴侣参与蛋白质的合成、折叠、积聚、装配、运输和降解; 通过调控线粒体通道,抑制Caspase3 来减少细胞凋亡[3]; 降低间质成纤维母细胞中的胶原沉积, 有效地抑制了肾上皮细胞纤维化[4]; 在缺血性应激中调整了GPx、GR 的活性, 从而调整了细胞内的氧化.还原应激状态, 在缺氧状态下保护细胞[5]。然而, HSP70 是在损伤过程的某个阶段增加以及在损伤修复后局部已表现出明显的耐损伤变化时又怎样变化, 尚未见报道。


本实验结果显示,B、C 组HSP70 仅少量表达, 与A 组比较无统计学意义; 而在D、E 组HSP70 均大量表达, 且在肌肉组织中的表达E 组略高于D 组。提示HSP70 的大量表达出现在损伤修复过程和修复之后, 说明HSP70 的大量表达对损伤的修复和耐损伤的产生起着十分重要的作用。其机制还待进一步研究。


【补充材料】


HSP70 家族是成员最多、最为重要的HSPs。HSP70 作为蛋白成熟过程中的分子伴侣, 参与细胞周期调节、DNA 损伤修复及细胞凋亡, 在配子及胚胎的发育、机体衰老的过程中具有重要生理作用。HSP70 可通过CD14 依赖性通路刺激细胞因子的产生, 表明HSP70 具有细胞因子作用。HSP70 能刺激PBMCs 体外扩增γδT细胞, 并诱导其表达高水平的IFN-γ、IL-2 、TNF、IL-8 等细胞因子, 显示HSP70 具有抗肿瘤能力。通常机体细胞在环境中不利因素的作用下都能发生应激反应和HSP70 的表达, 因此, 可将HSPs 尤其是HSP70 的表达作为一个潜在性的环境应激和毒性的量化指标。(来源 《HSP70 的生物学功能新进展》 作者:张晓鹏    国外医学卫生学分册 2002年第29卷第6期)


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